Cromatografia în strat subțire (TLC) este o tehnică cromatografică utilizată pe scară largă în chimia analitică, biochimie și cercetarea farmaceutică. Plăcile TLC joacă un rol crucial în acest proces, servind ca fază staționară în care are loc separarea componentelor. După rularea unui experiment TLC, următorul pas este detectarea compușilor separați pe placa TLC. În acest blog, în calitate de furnizor de plăci TLC, voi introduce câteva metode comune de detectare a plăcilor TLC.
Detectare vizuală
Detectarea vizuală este cea mai simplă și mai simplă metodă pentru analiza TLC. Este aplicabil atunci când compușii care sunt separați sunt colorați. De exemplu, în analiza pigmenților naturali, cum ar fi clorofila și carotenoizii, acești pigmenți au culori distincte care pot fi observate direct pe placa TLC. Petele colorate separate pot fi identificate cu ușurință și pot fi calculate valorile lor Rf (factor de retenție).
Cu toate acestea, majoritatea compușilor organici sunt incolori, ceea ce face imposibilă detectarea vizuală. În astfel de cazuri, trebuie să folosim alte metode de detectare pentru a face compușii vizibili.
Detectare UV
Detectarea ultravioletelor (UV) este una dintre cele mai frecvent utilizate metode pentru analiza TLC. Mulți compuși organici absorb lumina UV, fie datorită prezenței cromoforilor precum inele aromatice, duble legături carbon-carbon sau grupări carbonil.
Pentru a efectua detectarea UV, o placă TLC este plasată sub o lampă UV. Există două tipuri de lămpi UV utilizate în mod obișnuit: UV cu undă scurtă (254 nm) și UV cu undă lungă (365 nm). Când un compus de pe placa TLC absoarbe lumina UV, poate apărea ca o pată întunecată pe un fundal fluorescent dacă placa TLC este pre-acoperită cu un indicator fluorescent. Indicatorul fluorescent emite lumină vizibilă atunci când este expus la lumina UV, iar compusul care absoarbe lumina UV stinge fluorescența, creând o pată întunecată.
Detectarea UV este nedistructivă, ceea ce înseamnă că compușii de pe placa TLC pot fi analizați în continuare dacă este necesar. De asemenea, este relativ rapid și sensibil, capabil să detecteze cantități mici de compuși. Pentru mai multe informații despre plăcile TLC potrivite pentru detectarea UV, puteți consultaPlăci TLC din aluminiuşiPlăci TLC din sticlă, care sunt concepute pentru a oferi performanțe excelente în detectarea UV.
Detectare chimică
Detectarea chimică presupune utilizarea de reactivi chimici pentru a reacționa cu compușii de pe placa TLC, producând produse colorate sau fluorescente care pot fi ușor observate. Există mulți reactivi chimici diferiți, fiecare specific pentru anumite tipuri de compuși.
Detectarea vaporilor de iod
Vaporii de iod sunt un reactiv de uz general care poate reacționa cu mulți compuși organici, în special cu cei cu legături duble sau inele aromatice. Pentru a utiliza vapori de iod pentru detecție, o placă TLC este plasată într-o cameră închisă care conține cristale de iod. Iodul se sublimează pentru a forma un vapor, care reacţionează cu compuşii de pe placa TLC, producând pete maro sau galbene. Detectarea iodului este reversibilă, deoarece iodul poate fi îndepărtat din compuși permițând plăcii să stea în aer pentru un timp. Acest lucru îl face potrivit pentru analiza ulterioară a compușilor.
Reactivi pe bază de acid sulfuric
Reactivii pe bază de acid sulfuric sunt adesea utilizați pentru detectarea compușilor organici, cum ar fi carbohidrații, steroizii și lipidele. De exemplu, o soluție de acid sulfuric și etanol poate fi pulverizată pe placa TLC, urmată de încălzire. Acidul sulfuric deshidratează compușii organici, producând pete carbonizate care sunt ușor vizibile. Cu toate acestea, această metodă este distructivă, deoarece compușii sunt modificați chimic în timpul procesului de detectare.
Detectarea ninhidrinei
Ninhidrina este un reactiv specific pentru detectarea aminoacizilor și aminelor. Când ninhidrina reacționează cu aminoacizii sau aminele de pe placa TLC, formează un compus de culoare violet numit purpuriu Ruhemann. Această reacție este foarte sensibilă și este utilizată în mod obișnuit în analiza proteinelor și peptidelor.
Detectarea fluorescenței
Detectarea fluorescenței este utilizată atunci când compușii analizați sunt fluorescenți sau pot fi fluorescenți prin derivatizare. Unii compuși au fluorescență inerentă, cum ar fi anumite produse naturale și unele medicamente farmaceutice. În alte cazuri, compușii non-fluorescenți pot fi reacționați cu reactivi fluorescenți pentru a-i face fluorescenți.
Detectarea fluorescenței oferă sensibilitate și selectivitate ridicate. Poate detecta cantități foarte mici de compuși, făcându-l potrivit pentru analiza urmelor. Un detector de fluorescență este utilizat pentru a excita compușii fluorescenți de pe placa TLC și pentru a măsura fluorescența emisă. Intensitatea fluorescenței poate fi utilizată pentru a cuantifica cantitatea de compus prezent.
Detectarea radioactivă
Detectarea radioactivă este utilizată atunci când compușii analizați sunt radiomarcați. Această metodă este utilizată în mod obișnuit în cercetarea biochimică și farmaceutică, unde compușii marcați radioactiv sunt utilizați pentru a studia căile metabolice, distribuția medicamentelor și interacțiunile proteină-ligand.
O placă TLC cu compuși radiomarcați este plasată în contact cu un film sensibil la radiații sau cu un ecran de fosfor. Emisiile radioactive de la compuși expun filmul sau excită ecranul cu fosfor, producând o imagine care arată distribuția compușilor marcați radioactiv pe placa TLC. Detectarea radioactivă este foarte sensibilă și poate detecta niveluri foarte scăzute de radioactivitate.
Alegerea corectă a metodei de detectare
Atunci când alegeți o metodă de detectare pentru plăcile TLC, trebuie luați în considerare câțiva factori:
Natura compușilor
Structura chimică și proprietățile compușilor analizați determină care metodă de detectare este cea mai potrivită. De exemplu, dacă compușii sunt colorați, detectarea vizuală poate fi utilizată direct. Dacă conțin cromofori, detectarea UV poate fi adecvată. Pentru aminoacizi, detectarea ninhidrinei este o alegere bună.
Cerințe de sensibilitate
Cantitatea de probă disponibilă și nivelul necesar de sensibilitate de detecție joacă, de asemenea, un rol în selectarea metodei. Detectarea fluorescenței și detecția radioactivă sunt în general mai sensibile decât detectarea vizuală sau a vaporilor de iod și sunt potrivite pentru analiza urmelor.
Distructivitatea
Dacă este necesară o analiză suplimentară a compușilor de pe placa TLC, ar trebui alese metode de detectare nedistructivă, cum ar fi detectarea UV și detectarea vaporilor de iod. Metodele distructive precum reactivii pe bază de acid sulfuric sunt potrivite numai atunci când compușii nu trebuie recuperați.
În calitate de furnizor de plăci TLC
În calitate de furnizor de plăci TLC, înțelegem importanța furnizării de plăci TLC de înaltă calitate, care sunt compatibile cu diferite metode de detectare. NoastrePlăci TLC din aluminiuşiPlăci TLC din sticlăsunt realizate cu faze staționare de înaltă puritate și sunt concepute pentru a oferi performanțe excelente de separare și detecție.
De asemenea, oferim asistență tehnică clienților noștri, ajutându-i să aleagă plăcile TLC și metodele de detectare potrivite pentru aplicațiile lor specifice. Fie că sunteți cercetător într-un laborator universitar, analist de control al calității într-o companie farmaceutică sau om de știință într-un institut de cercetare chimică, vă putem oferi produsele și serviciile de care aveți nevoie.
Dacă sunteți interesat să achiziționați plăcile noastre TLC sau aveți întrebări despre metodele de detectare TLC, vă rugăm să nu ezitați să ne contactați pentru o discuție de achiziție. Așteptăm cu nerăbdare să lucrăm cu dumneavoastră pentru a vă satisface nevoile cromatografice.
Referințe
- Snyder, LR, Kirkland, JJ și Glajch, JL (2010). Dezvoltare practică a metodei HPLC. John Wiley & Sons.
- Stahl, E. (1969). Cromatografia în strat subțire: un manual de laborator. Springer - Verlag.
- McReynolds, WO (1970). Cromatografia de gaze: o abordare practică. Presa Pergamon.